基础医学论文_一种快速提取组织外泌体的分离富
文章摘要:本文提供一种快速提取组织外泌体的分离富集方法。通过将目标组织用机械法切碎，加入组织消化酶进行组织解离和过滤，将获得的组织细胞悬液依次进行差速离心、超离、尺寸排阻和超滤，实现组织高质量外泌体的富集纯化。组织解离方法比较试验中，采用组织消化酶解离组织得到的蛋白质含量更高，获得的外泌体组织来源的蛋白质污染小。富集小鼠心组织、小鼠肝组织、小鼠肾组织、人结肠癌组织、人乳腺癌组织和动脉粥样硬化组织的外泌体，并对其进行纳米粒径追踪和透射电镜观察。结果显示，外泌体的粒径均在30～150 nm内，结构清晰明确。对小鼠肝组织富集的外泌体进行蛋白质印迹分析。结果显示，阳性蛋白质标志物CD9、ALIX和CD63的表达，TSG101弱表达，阴性蛋白质标志物Calnexin无表达。本方法集合多种分离措施，能够达到分离纯化外泌体的作用，同时简化了分离组织外泌体的步骤，相对于其他方法，全程只需要4～5 h，节省了富集时间，所富集的外泌体纯度高、可溶性杂蛋白质污染小，实用性更加广泛。使用微量组织样本富集的外泌体即可满足后续纳米粒径追踪、蛋白质印迹、透射电镜和转录物组等分析。
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